外泌體電鏡檢測技術(shù)服務(wù)

更新時間：2024-09-26

簡要描述：

外泌體電鏡可以直觀的看到粒子的形態(tài)，因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性，但是包括支原體、鐵蛋白聚團(tuán)、聚乙二醇蛋白聚團(tuán)、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似，并且電鏡只能展示局部景象。因此，電鏡成像無法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子，且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量。

1、樣品制備：

收集外泌體樣品：收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液、生物體液（如血漿、尿液等）或組織液體（如腦脊液等），其中包含外泌體。

預(yù)處理：通常需要對樣品進(jìn)行初步處理，如離心去除細(xì)胞碎片和大顆粒物質(zhì)。
電鏡固定：

固定樣品：使用適當(dāng)?shù)墓潭▌ㄈ缥於⒗鋬龉潭ǖ龋⑼饷隗w固定在其原來的狀態(tài)中，以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

洗滌：用緩沖液洗滌樣品，以去除過剩的固定劑。

2、脫水和浸透：

脫水：在一系列濃度遞增的乙醇溶液中，逐步將樣品中的水分脫除，以使樣品適應(yīng)后續(xù)的樹脂浸透。

浸透：使用合適的樹脂（如Epon、Araldite等）浸透樣品，使其在固化后具有適合電鏡觀察的硬度和清晰度。

3、樹脂包埋：

預(yù)埋：將浸透后的樣品置于埋脂盒中，加入適量的樹脂，并根據(jù)需要進(jìn)行定向。

固化：根據(jù)樹脂的不同，采用適當(dāng)?shù)臏囟群蜁r間進(jìn)行固化，使樣品堅硬并固定在樹脂塊中。

4、超微切片：

準(zhǔn)備超薄切片：使用超薄切片機，將樹脂塊切割成約60-90納米厚度的超薄切片。

收集切片：將切片收集在銅或金網(wǎng)格上，以便后續(xù)的電鏡觀察。

5、電鏡觀察：

雙重染色：通常首先使用重金屬鹽（如鈾酸和鉛酞）對切片進(jìn)行雙重染色，以增加對比度。

電鏡觀察：將樣品放置在透射電鏡中，利用電子束通過樣品，觀察外泌體的形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

拍攝圖像：使用透射電子顯微鏡（TEM）或掃描電子顯微鏡（SEM）拍攝外泌體的高分辨率圖像。

外泌體電鏡觀察是一項復(fù)雜的技術(shù)，需要在專業(yè)實驗室中進(jìn)行。實驗條件和步驟可能會因?qū)嶒災(zāi)康暮驮O(shè)備不同而有所變化。為了獲得高質(zhì)量的觀察結(jié)果，建議在進(jìn)行外泌體電鏡觀察時咨詢專業(yè)人士或參考相關(guān)文獻(xiàn)。