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fish技術(shù)服務(wù)

更新時(shí)間:2025-07-01

簡要描述:

fish技術(shù)服務(wù)可以知道核酸在幾十或幾百個(gè)標(biāo)本的表達(dá)定位情況,可用于分析核酸在癌與癌旁的表達(dá)差異、核酸表達(dá)與生存期的相關(guān)性、核酸表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系等等。

   fish技術(shù)服務(wù)早期一般用于了解基因或染色體發(fā)生擴(kuò)增、缺失、融合或斷裂,適用于:產(chǎn)前診斷、產(chǎn)后遺傳病檢測(cè)、腫瘤診斷及預(yù)后評(píng)估等。樣本來源廣泛:組織、脫落細(xì)胞、羊水、血液、骨髓都可以檢測(cè),且不僅限于新鮮樣本,2-3年的石蠟樣本都可以檢測(cè)。

  FISH亦可檢測(cè)組織芯片中的核酸(目前常用于檢測(cè)ncRNA:microRNA、lncRNA、circRNA),可以知道核酸在幾十或幾百個(gè)標(biāo)本的表達(dá)定位情況,可用于分析核酸在癌與癌旁的表達(dá)差異、核酸表達(dá)與生存期的相關(guān)性、核酸表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系等等。

  fish技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程:


fish技術(shù)服務(wù)(Florescence In-Situ Hybridization簡稱FISH)是一種利用非放射性的熒光信號(hào)對(duì)原位雜交樣本進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。它將熒光信號(hào)的高靈敏度、安全性,熒光信號(hào)的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來,通過熒光標(biāo)記的DNA探針與待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行原位雜交,在熒光顯微鏡下對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行辨別和計(jì)數(shù),從而對(duì)染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)和診斷,為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依據(jù)。自20世紀(jì)80年代末,Pinkel和Heiles將FISH技術(shù)引入染色體檢測(cè)領(lǐng)域后,F(xiàn)ISH技術(shù)就在臨床診斷及科研工作中得到了廣泛的運(yùn)用,顯示出與一些傳統(tǒng)技術(shù)相比的明顯優(yōu)勢(shì)。

 

  熒光原位雜交技術(shù)fish技術(shù)服務(wù)與傳統(tǒng)的免疫組織化學(xué)法(IHC)相比,F(xiàn)ISH具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。目前免疫組織化學(xué)法正廣泛應(yīng)用于腫瘤等多個(gè)領(lǐng)域的臨床診斷。免疫組化的檢測(cè)對(duì)象是疾病相關(guān)的蛋白。由于蛋白的表達(dá)和本身的構(gòu)象受各種因素的影響很大(例如酸、堿和變性劑),檢測(cè)條件的穩(wěn)定性對(duì)檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。此外,免疫組化檢測(cè)結(jié)果的判斷依賴于檢測(cè)者對(duì)顯色結(jié)果的主觀判斷,對(duì)于一些弱陽性的結(jié)果,不同的檢測(cè)者容易產(chǎn)生分歧。上述的因素都可能影響醫(yī)生對(duì)病情的終診斷。

 

  熒光原位雜交技術(shù)fish技術(shù)服務(wù)的對(duì)象是細(xì)胞中的DNA,致密的雙螺旋結(jié)構(gòu)使DNA可以歷經(jīng)千百萬年而依然保持良好,其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,不易被環(huán)境條件影響,為熒光原位雜交技術(shù)的穩(wěn)定提供了良好的基礎(chǔ)。此外,熒光原位雜交結(jié)果的判定借助于對(duì)熒光的顏色判斷和信號(hào)計(jì)數(shù),客觀地量化了檢測(cè)地結(jié)果。如果借助于相應(yīng)的FISH操作系統(tǒng)(例如Abbott-Vysis公司的Hybrit雜交儀和VP2000樣本預(yù)處理系統(tǒng))和染色體成像系統(tǒng)就能實(shí)現(xiàn)整個(gè)FISH操作的自動(dòng)化,大限度的降低操作者和檢測(cè)者的主觀因素,確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

 

  PCR由于靈敏度高,操作簡便快捷是近年來應(yīng)用比較多的基因診斷技術(shù),但PCR診斷技術(shù)的假陰性和假陽性的比例較高,對(duì)同一樣本也只能作一次分析,不能重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。隨著探針技術(shù)的不斷發(fā)展,F(xiàn)ISH目前的靈敏度已經(jīng)接近或達(dá)到PCR的水平,并能很好彌補(bǔ)PCR技術(shù)的局限。熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè)不僅有極低的假陽性、假陰性的比例(以Abbott-Vysis的產(chǎn)前診斷探針為例,29,000例的使用結(jié)果證實(shí)正確率高達(dá)99.9%),還能對(duì)同一樣本進(jìn)行多次的FISH操作以及利用不同顏色的熒光探針一次檢測(cè)多個(gè)染色體或基因的異常,大大節(jié)省了檢測(cè)的時(shí)間。此外,通過fish技術(shù)服務(wù)可以對(duì)染色體或特定基因的數(shù)目異常,特定片斷的缺失、易位和重排進(jìn)行診斷研究。

 

  熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)技術(shù)是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示DNA序列位置的方法。該技術(shù)具有快速、安全、靈敏度高以及探針可長期保存等特點(diǎn),目前已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、基因定位、基因作圖、基因擴(kuò)增,產(chǎn)前診斷及哺乳動(dòng)物染色體進(jìn)化研究等領(lǐng)域。

 

fish技術(shù)服務(wù)基本原理

  簡單點(diǎn)說就是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,就是我們將外源核酸(也就是常說的分子探針)與組織、細(xì)胞上待檢測(cè)的DNA或RNA進(jìn)行配對(duì),形成核酸雜交分子,再經(jīng)過一定手段將這個(gè)雜交分子的位置顯示出來。

 

  探針分類
  ●DNA探針:雙鏈重組DNA(cDNA)探針是目前應(yīng)用較多的探針類型。特點(diǎn)敏感性高,同樣操作難道及費(fèi)用較高。
  ●RNA探針:今年來RNA探針應(yīng)用越來越多,這是由于單鏈RNA探針分子小,在組織內(nèi)通透性好,用前無需變性,雜交中也不存在退火的情況,可以全部與靶核酸配對(duì)雜交
  ●寡核苷酸探針:這類探針多采用DNA合成儀,在不溶性硅石支持物上合成單鏈DNA寡核苷酸。
  核酸雜交的穩(wěn)定性依次為:

  RNA—RNA>DNA—RNA>DNA—DNA

 

應(yīng)用

  fish技術(shù)服務(wù)已經(jīng)在細(xì)胞遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、基因定位、基因作圖、基因擴(kuò)增、產(chǎn)前診斷及哺乳動(dòng)物染色體進(jìn)化研究等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

 

  一、染色體結(jié)構(gòu)變異與非整倍體的檢測(cè)

  熒光原位雜交簡化了染色體結(jié)構(gòu)變異的檢測(cè)。如植物染色體的非整倍體是由于染色體行為異常,即可能是雙親配子染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)差異引起或染色體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)等因素導(dǎo)致。利用原位雜交可比較容易地檢測(cè)出缺失、附加或替換的染色體。

 

  二、基因擴(kuò)增和缺失的檢測(cè)

  FISH空間分辨率和敏感性使得親本和擴(kuò)增基因在抗病蟲害細(xì)胞中定位成為可能。被擴(kuò)增基因主要在同一染色體臂上,但離初始親本基因有一定距離,且經(jīng)常獨(dú)立地位于染色體端粒部位;FISH分析表明細(xì)胞斷裂可能是由于染色體含有擴(kuò)增區(qū)域的結(jié)構(gòu)重排。同時(shí)用FISH 可定位轉(zhuǎn)基因植物中外源基因位置和拷貝數(shù),此法在番茄、煙草、大麥、小麥、黑麥等作物中已獲成功。利用FISH技術(shù)也可檢測(cè)一些與遺傳性疾病相關(guān)的基因缺失,如成功檢測(cè)了aniridia疾病患者的缺失基因。

 

  三、基因定位

  熒光原位雜交的基因定位技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。PP2Ac突變型肺癌相關(guān)基因在染色體區(qū)域的定位,熒光顯微鏡下觀察記錄和分析雜交信號(hào)的特征。結(jié)果在正常人淋巴細(xì)胞的染色體5q23-31可見明顯雜交信號(hào),在GLC-82細(xì)胞的5號(hào)和7號(hào)染色體上出現(xiàn)較強(qiáng)信號(hào)。說明點(diǎn)突變引起PP2Ac活性改變,從而基因易位,導(dǎo)致肺腫瘤的產(chǎn)生。FISH技術(shù)與生化、計(jì)算機(jī)和重組DNA技術(shù)結(jié)合檢測(cè)Alu位點(diǎn),表明DNA序列與帶型有關(guān)。用FISH技術(shù)對(duì)人類基因組中編碼基因分布的研究揭示,基因主要集中在染色體上G+C(占全基因組35% )的DNA區(qū)段。FISH技術(shù)為著絲粒結(jié)構(gòu)研究提供了重要手段。應(yīng)用FISH技術(shù)可直接觀察染色體端粒,這簡化了染色體在核內(nèi)的結(jié)構(gòu)和功能研究。

 

  四、基因作圖
  用fish技術(shù)服務(wù)可直接檢測(cè)DNA在染色體上的位置,所確定位置是基因在染色體上實(shí)際的物理位置。由于原位雜交不受位點(diǎn)內(nèi)變異和位點(diǎn)間拷貝數(shù)的影響,F(xiàn)ISH技術(shù)已成為重復(fù)序列和多基因家族作圖的重要手段。多色探針標(biāo)記為探針定位提供了一種更簡便的方法。如檢測(cè)時(shí)2個(gè)探針用紅色,第3探針用綠色,則綠色位點(diǎn)的位置要么在2紅色位點(diǎn)之外,要么在它們之間,于是可確定探針順序。因此,探針被至少20kbp的序列隔開就可以用FISH技術(shù)將之定位。

 

 

毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作,秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值,為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想,為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富”的經(jīng)營理念,堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。

 

 

 

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